Kľúčový rozdiel - imunofluorescencia vs. imunohistochémia
Diagnostika chorôb, ktorá využíva molekulárne biologické metódy, sa stala novou oblasťou klinickej laboratórnej technológie. Obsahuje všetky testy a metódy na identifikáciu ochorenia a pochopenie príčiny ochorenia analýzou DNA, RNA alebo exprimovaných bielkovín v organizme. Rýchly pokrok v molekulárnej diagnostike umožnil základný výskum prenosných a neprenosných chorôb. Tieto sa používajú na stanovenie zmien v sekvencii alebo hladinách expresie v rozhodujúcich génoch alebo proteínoch zapojených do choroby. Imunofluorescencia (IF) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny. IF je typ IHC, kde sa na analýzu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok používa metóda fluorescenčnej detekcie, zatiaľ čo IHC používa na detekciu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok metódy založené na chemikáliách. Toto je kľúčový rozdiel medzi IF a IHC.
OBSAH
1. Prehľad a kľúčový rozdiel
2. Čo je to imunofluorescencia
3. Čo je to imunohistochémia
4. Podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou
5. Porovnanie vedľa seba - imunofluorescencia vs. imunohistochémia v tabuľkovej forme
6. Zhrnutie
Čo je to imunofluorescencia (IF)?
Imunofluorescencia je detekčná technika, kde sú protilátky použité v teste označené na účely detekcie fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými proteínmi. Značené sekundárne protilátky môžu mať za následok nežiaduce signály pozadia; preto je IF metóda založená na značení samotnej primárnej protilátky v súčasnosti, aby sa počas detekcie zabránilo nežiaducim signálom. Touto technikou je zabránené nešpecifickej väzbe medzi primárnou a sekundárnou protilátkou a je rýchlejšie, pretože nie je zahrnutý žiadny sekundárny inkubačný krok. Vylepšená je aj kvalita údajov.
Obrázok 01: Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP
Fluorochrómy alebo fluorescenčné farbivá sú zlúčeniny, ktoré môžu absorbovať žiarenie , výhodne excitované ultrafialové žiarenie. Keď častice dosiahnu z excitovaného stavu základný stav, vyžarujú žiarenie, ktoré je zachytené a detekované detektorom, čím sa vytvorí spektrum. Je veľmi dôležité, aby bola fluorescenčná značka kompatibilná a stabilná pre konkrétnu reakciu a aby bola správne konjugovaná s protilátkou, aby sa získali presné výsledky. Jedným z najpoužívanejších fluorochrómov je fluoresceín izotiokyanát (FITC), ktorý má zelenú farbu s absorpčnými a emisnými špičkovými vlnovými dĺžkami 490 nm, respektíve 520 nm. Rhodamín, ďalšie činidlo používané v IF, má červenú farbu a má zreteľné špičkové vlnové dĺžky absorpcie a emisie 553 nm a 627 nm.
Čo je to imunohistochémia (IHC)?
IHC je metóda molekulárneho testovania, ktorá sa používa na identifikáciu a potvrdenie prítomnosti antigénu v cieľovej bunke. Cieľovou bunkou môže byť infekčná častica, mikrobiálny patogén alebo malígna nádorová bunka. IHC využíva monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov prítomných na povrchu buniek cieľových buniek. Táto technika je založená na väzbe antigén-protilátka. Detekčný marker je konjugovaný s týmito protilátkami, aby sa detegovala prítomnosť alebo neprítomnosť konkrétneho antigénu. Tieto markery môžu byť chemické markery, ako sú enzýmy, fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne značené protilátky.
Obrázok 02: Plátok myšieho mozgu zafarbený imunohistochémiou
Najpopulárnejšia aplikácia IHC je v biológii rakovinových buniek na identifikáciu prítomnosti malígnych nádorov, ale používa sa aj na detekciu infekčných chorôb.
Aké sú podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
- Imunofluorescencia a imunohistochémia sa uskutočňujú za podmienok in vitro .
- Obe techniky sú založené na antigén-protilátke
- Obe sú veľmi rýchle techniky.
- Výsledky techník sú reprodukovateľné.
- Oba majú vylepšenú kvalitu údajov.
- Tieto techniky sa používajú v diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
Aký je rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
Imunofluorescencia vs Imunohistochémia | |
| IF je detekčná technika, kde sú protilátky použité v teste označené na detekciu fluorescenčnými farbivami alebo fluorescenčnými proteínmi. | IHC je detekčná technika, kde sú protilátky použité v teste označené na detekciu pomocou chemikálií alebo rádioaktívnych prvkov. |
| Presnosť | |
| Presnosť je pri technike IF vyššia v porovnaní s IHC. | Presnosť je v IHC nižšia. |
| Špecifickosť | |
| IF je konkrétnejší. | IHC je menej špecifický. |
Zhrnutie - Imunofluorescencia vs Imunohistochémia
Molekulárne mechanizmy priniesli mnoho zmien v oblasti medicíny, ktoré viedli k pokročilým metódam molekulárneho testovania, ktoré priniesli revolúcie v oblasti diagnostiky. Tieto vynálezy viedli k rýchlej a presnej identifikácii a potvrdeniu choroby, čím umožnili úspešné podávanie a výrobu liečiv. Tieto techniky sa používajú aj vo farmakológii s cieľom nájsť ciele liečiv a potvrdiť farmakokinetické vlastnosti liečiva počas metabolizmu liečiva. IF a IHC sú dve diagnostické metódy, ktoré sú založené na koncepte väzby antigénu a protilátky, aj keď spôsob detekcie v oboch technikách sa líši. IF používa princíp fluorescencie na detekciu antigénu a IHC používa koncept chemickej konjugácie na detekciu antigénu. Toto je rozdiel medzi IF a IHC.
Stiahnuť PDF verziu Imunofluorescencia vs Imunohistochémia
Môžete si stiahnuť verziu tohto článku vo formáte PDF a použiť ju na účely offline podľa citácie. Stiahnite si verziu PDF tu Rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou.
Referencie:
1. Aoki, Valéria a kol. "Priama a nepriama imunofluorescencia." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, K dispozícii tu. Prístup k 25. augustu 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha a kol. "Aplikácie imunohistochémie." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, august 2012, k dispozícii tu . Prístup k 25. augustu 2017.
Obrázok so súhlasom:
1. „Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP“ od Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2., Liu X.- Intranazálne dodanie transformujúceho rastového faktora- beta1 u myší po cievnej mozgovej príhode znižuje objem infarktu a zvyšuje neurogenézu v subventrikulárnej zóne; PMID 19077183 (CC BY 2.0) prostredníctvom Commons Wikimedia
2. „Hypotalamus myšieho tkaniva zafarbeného pomocou ABC-imunohistochémie“ Od zabbn-vlastná práca (CC BY-SA 3.0) cez Commons Wikimedia
